La valorisation des molécules bioactives issues des plantes médicinales est une stratégie prometteuse dans la recherche de principes actifs pour le traitement de la leishmaniose permettant de s’affranchir des problèmes de toxicité et de résistance provoqués par les traitements conventionnels.Trois plantes ont été choisies à savoir Artemisia herba-alba, Citrus limon et Pistacia lentiscus, chacune récoltées dans deux régions différentes de la Tunisie. Pour chaque plante, les molécules bioactives ont été extraites pour obtenir une huile essentielle et des extraits aqueux et organiques. L’activité antileishmanienne in vitro de tous ces extraits a été évaluée sur deux formes du parasite Leishmania major : amastigote axénique ou intramacrophagique. Les extraits et les huiles essentielles ont prouvé un potentiel antileishmanien important. L’activité dépendait aussi bien de la nature de l’extrait (technique d’extraction et/ou la région de récolte de la plante) que de la forme du parasite (axénique ou intramacrophagique). En raison de l’originalité des résultats, nous avons sélectionné l’extrait acétone du Citrus limon (Cext) pour être encapsulé une nanoémulsion (NE) stabilisée par la β-lactoglobuline (β-lg) et composée de 80 % de phase aqueuse (solution de β-lg à 1,2 (m/m) %) et de 20 % de phase huileuse (huile de sésame (SO) ou Medium Chain Triglycerides (MCT)). L’encapsulation de Cext à des concentrations de 0,1, 0,5 et 1 (m/m) % a permis de sélectionner le système le plus actif vis-à-vis des amastigotes intramacrophagiques, le moins toxique vis-à-vis des cellules hôtes et n'interférant pas dans la stabilité des NEs au cours du temps. Ainsi, la NE à base de MCT contenant 0,1 % d'extrait (Cext NE MCT) a montré une cytotoxicité minimale (Indice de Sélectivité = 21,4 ± 6,1). Par ailleurs, en dépit de sa toxicité, la NE à base d’HS (Cext NE SO) a été également sélectionnée pour les propriétés cicatrisantes déjà décrites pour l'SO. Enfin, l’évaluation de l’efficacité antileishmanienne in vivo a été réalisée par application topique de NE contenant ou pas l’extrait sur des lésions de leishmaniose cutanée à L. major chez des souris BALB/c. Les résultats ont prouvé que l’efficacité antileishmanienne des formulations dépendait significativement du type d’huile utilisée. Cext NE MCT a démontré la meilleure efficacité révélée par une diminution significative de la charge parasitaire, une stabilisation de la taille de la lésion, ainsi qu’une diminution de l’inflammation de la peau des souris. Les résultats du traitement avec la NE MCT sans extrait a prouvé que la formulation choisie contribue à l’efficacité antileishmanienne par un effet de synergie. En outre, l’encapsulation a permis de pallier les problèmes de toxicité observés lors de l'application topique de Cext MCT. D’autre part, l'application de Cext NE SO a engendré une toxicité neurologique et aucune efficacité antiparasitaire n'a été notée. Cependant, Cext SO administré directement sur les lésions a révélé une bonne efficacité du traitement, aussi bien par la diminution de la taille des lésions que dans la réduction de la charge parasitaire chez les souris traitées. L’analyse histologique des peaux lésées a également montré une cicatrisation de la plaie. L'efficacité de cette formulation pourrait être expliquée par une amélioration de la pénétration de l'extrait à travers la peau en raison de la présence dans l'huile de sésame d'acides gras mono et polyinsaturés, tels que les acides oléique et linoléique. Cette étude a permis de mettre en évidence le potentiel des formulations lipidiques dans le traitement local des lésions de Leishmaniose cutanée.